引言
DPPH（2,2-二苯基-1-苯肼基）自由基清除实验是一种常用的抗氧化活性测试方法。在实验中，阳性对照的设置对于准确评估抗氧化剂的活性至关重要。本文将详细介绍DPPH实验阳性对照的设置及其在抗氧化剂效果研究中的作用。
DPPH自由基清除实验原理
DPPH自由基是一种稳定的自由基，具有较强的氧化性。在DPPH自由基清除实验中，抗氧化剂可以与DPPH自由基发生反应，使其稳定，从而降低其吸收的光谱强度。通过测量光谱强度的变化，可以评估抗氧化剂的清除能力。
阳性对照的设置
1. 抗氧化剂的标准品
在DPPH实验中，通常使用维生素E作为阳性对照。维生素E是一种常见的抗氧化剂，具有已知的自由基清除能力。使用维生素E作为阳性对照可以提供一个标准，以便比较待测样品的抗氧化活性。
2. 阳性对照的浓度
阳性对照的浓度应选择在实验范围内能够观察到明显自由基清除效果的浓度。通常，维生素E的浓度范围为10-100 μg/mL。
3. 阳性对照的制备
将维生素E溶解于无水乙醇或丙酮中，配制成所需浓度的溶液。由于维生素E在空气中容易氧化，因此应将溶液保存在棕色瓶中，并置于低温环境中。
阳性对照在实验中的作用
评估抗氧化剂的活性：通过比较待测样品与阳性对照的自由基清除能力，可以评估待测样品的抗氧化活性。
排除实验误差：阳性对照的设置有助于排除实验操作和仪器误差，确保实验结果的准确性。
确定最佳实验条件：通过观察阳性对照在不同条件下的自由基清除效果，可以确定最佳的实验条件，如浓度、反应时间等。
实验步骤
样品制备：将待测样品溶解于无水乙醇或丙酮中，配制成所需浓度的溶液。
阳性对照制备：按照上述方法制备维生素E溶液。
DPPH溶液制备：将DPPH自由基溶解于无水乙醇中，配制成5×10^-5 M的溶液。
反应混合：取一定量的样品或阳性对照溶液，加入等体积的DPPH溶液，混匀。
反应时间：在室温下反应30分钟。
测量吸光度：在517 nm波长下测量溶液的吸光度。
计算自由基清除率：根据吸光度变化计算自由基清除率。
结论
DPPH实验阳性对照的设置对于评估抗氧化剂的活性具有重要意义。通过使用已知的抗氧化剂作为阳性对照，可以更准确地评估待测样品的抗氧化活性，并排除实验误差。在实际应用中，应根据具体实验目的和条件选择合适的阳性对照和实验方法。