摘要
MTT实验（3-(4,5-二乙基-2,7-二氢-1,3-氧杂-2,4-二氮杂苯）盐酸盐比色法）是一种常用的细胞毒性检测方法。本文将详细介绍MTT实验的原理、操作步骤、应用领域以及其背后的科学原理。
引言
细胞毒性实验在药理学、毒理学、肿瘤学等领域具有广泛的应用。MTT实验因其操作简便、快速、灵敏度高、成本较低等优点，被广泛应用于细胞毒性的评估。本文旨在帮助读者深入了解MTT实验的原理和操作方法。
MTT实验原理
MTT原理
MTT实验的原理是基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶（SDH）将黄色的MTT（3-(4,5-二乙基-2,7-二氢-1,3-氧杂-2,4-二氮杂苯）盐酸盐）还原成蓝色的甲臜（formazan）。
反应方程式
[ \text{MTT} + \text{NADP}^+ \rightarrow \text{Formazan} + \text{H}^+ + \text{NADP}^+ ]
形成Formazan
生成的Formazan在波长为490nm处的吸光度与细胞活力成正比，因此通过测量吸光度可以间接反映细胞的活力。
MTT实验操作步骤
实验材料
- 细胞培养板
- 细胞悬液
- MTT溶液
- DMSO（二甲基亚砜）
- 吸光度计
实验步骤
- 将细胞接种于96孔培养板中，培养至对数生长期。
- 添加不同浓度的药物或毒素，进行细胞毒性实验。
- 待药物作用一定时间后，弃去培养液。
- 每孔加入100μl MTT溶液，孵育4小时。
- 弃去MTT溶液，每孔加入150μl DMSO，充分振荡使Formazan溶解。
- 在490nm波长处测定吸光度。
MTT实验应用领域
药理学
MTT实验可以用于筛选药物对肿瘤细胞、病原体等靶细胞的细胞毒性。
毒理学
评估环境中存在的化学物质对细胞的毒性。
肿瘤学
研究肿瘤细胞对化疗药物的反应。
MTT实验注意事项
药物浓度选择
选择合适的药物浓度是实验成功的关键。一般采用梯度稀释法进行药物浓度选择。
孵育时间
孵育时间过长或过短都会影响实验结果，需要根据细胞种类和药物浓度进行调整。
重复性
为了保证实验结果的可靠性，需要设置足够的重复孔。
结论
MTT实验是一种简单、快速、灵敏的细胞毒性检测方法。通过了解其原理和操作步骤，可以帮助研究人员在各个领域更好地评估细胞的毒性。