引言

口腔上皮细胞刮取实验是一种简单、非侵入性的细胞学检查方法，常用于临床诊断、教学演示和科研研究。它主要用于检测口腔黏膜病变、评估细胞形态学变化、进行DNA提取或细胞遗传学分析。例如，在口腔癌筛查中，通过刮取口腔上皮细胞可以快速观察细胞异型性；在教学中，它帮助学生直观了解人体上皮细胞的结构。这种操作安全、成本低，但需要严格遵守无菌原则和操作规范，以避免污染、细胞损伤或结果偏差。本指南将详细阐述实验原理、所需材料、操作步骤、注意事项及常见问题处理，帮助实验者高效、安全地完成实验。

实验原理

口腔上皮细胞来源于口腔黏膜的复层鳞状上皮，这些细胞不断更新，表面细胞易于脱落。通过刮取，我们可以获取新鲜的上皮细胞样本，用于显微镜观察、染色分析或分子生物学检测。原理基于细胞的自然脱落和机械刮取：使用无菌刮片或棉签轻轻摩擦口腔内壁，收集附着在工具上的细胞。收集的细胞可直接涂片、固定或溶解提取DNA。该方法适用于检测炎症、感染（如念珠菌）、癌前病变或遗传性疾病。例如，在临床中，刮取细胞后进行巴氏染色（Papanicolaou染色）可清晰显示细胞核形态，帮助诊断口腔鳞状细胞癌。原理简单，但准确性依赖于操作的轻柔程度和样本新鲜度。

所需材料与设备

进行口腔上皮细胞刮取实验需要准备以下材料，确保所有物品均为无菌级别，以防止微生物污染。材料清单如下：

  • 刮取工具：无菌木质或塑料刮片（spatula，如口腔细胞刮片，长度约10-15cm），或无菌棉签（cotton swab，推荐尼龙或聚酯纤维头，避免棉花纤维脱落）。例如，在临床中常用的是专用口腔细胞采集器，其边缘光滑，便于刮取而不损伤组织。
  • 固定液（如需保存样本）：95%乙醇或10%福尔马林溶液，用于细胞固定，防止自溶。
  • 染色试剂（如需镜检）：巴氏染色套件（包括苏木精、橙黄G、EA染液），或吉姆萨染液用于快速染色。
  • 显微镜载玻片和盖玻片：标准显微镜载玻片（76mm×26mm），用于涂片；盖玻片（24mm×24mm）用于封片。
  • 其他辅助用品：无菌手套、口罩、一次性压舌板（用于撑开口腔）、生理盐水或PBS缓冲液（用于稀释或冲洗）、离心管（1.5mL，用于细胞溶解）、移液器（1-1000μL）。
  • 设备：生物安全柜（用于无菌操作）、光学显微镜（40×-400×放大倍数）、离心机（如需提取细胞核）、恒温箱（37°C，用于细胞培养，如需）。

所有材料应在实验前检查有效期和无菌状态。例如，棉签应包装完整，无破损；固定液应新鲜配制，避免挥发。

详细操作步骤

以下步骤适用于标准口腔上皮细胞刮取实验，假设用于显微镜观察。整个过程应在无菌环境中进行，时间控制在5-10分钟内，以保持细胞活性。每个步骤包括主题句、详细说明和示例。

1. 准备工作

首先，确保实验环境清洁，穿戴个人防护装备。主题句：准备工作是实验成功的基础，能有效防止交叉污染。

  • 在生物安全柜或洁净工作台上操作，消毒台面（使用70%乙醇擦拭）。
  • 洗手并戴上无菌手套和口罩。告知受试者（如患者或学生）实验目的，征得同意。
  • 准备所有材料，按顺序摆放：刮片、载玻片、固定液等。示例：如果进行DNA提取，预先准备裂解缓冲液（含蛋白酶K和SDS），配方为：10mM Tris-HCl pH 8.0, 100mM NaCl, 25mM EDTA, 0.5% SDS, 0.1mg/mL蛋白酶K。

2. 受试者准备

指导受试者正确姿势和口腔清洁。主题句：受试者的配合直接影响样本质量。

  • 要求受试者在实验前1小时内避免进食、饮水或刷牙，以减少食物残渣干扰。
  • 让受试者坐直，张开嘴巴，使用压舌板轻轻压下舌头，暴露颊黏膜（口腔内侧壁，通常选择此区域，因为细胞丰富且易操作）。
  • 如果需要，用生理盐水漱口1-2次，去除表面污垢，但不要过度漱口以免刮取过多唾液。示例：在教学实验中，学生可互相操作，先用清水漱口，然后用棉签轻轻擦拭颊黏膜10秒，观察棉签是否变黄（表示细胞附着）。

3. 刮取细胞

使用刮片或棉签进行刮取，动作要轻柔均匀。主题句：刮取过程需控制力度，避免损伤深层组织或引入血液。

  • 将刮片或棉签置于颊黏膜上，从后向前轻轻刮擦5-10次，覆盖面积约1cm²。力度适中，仅刮取表层细胞，不要用力按压。
  • 如果使用刮片，可旋转刮片以均匀收集细胞；棉签则需在黏膜上滚动。
  • 刮取后，将工具置于载玻片上或直接浸入固定液/离心管中。示例：对于临床诊断，医生使用塑料刮片在患者颊黏膜刮取，立即涂片。如果用于DNA提取，将刮片浸入含500μL裂解缓冲液的离心管中，轻轻搅动释放细胞。

4. 样本处理与涂片

将收集的细胞制成涂片或溶解。主题句：及时处理样本可防止细胞降解。

  • 涂片法（用于镜检）：将刮片在载玻片上均匀涂抹一层细胞，形成薄层。空气干燥1-2分钟，然后浸入95%乙醇固定10分钟。示例：涂片后，可进行巴氏染色：先浸入苏木精5分钟（染核），水洗后浸入橙黄G 2分钟（染胞质），再浸入EA染液3分钟，最后脱水、透明、封片。

  • 溶解法（用于分子生物学）：将刮片浸入离心管，涡旋混合1分钟，然后离心（10,000g，5分钟）收集细胞沉淀。示例：提取DNA时，向沉淀中加入蛋白酶K消化，然后用酚-氯仿抽提，乙醇沉淀DNA。完整DNA提取代码示例（Python模拟，用于计算DNA浓度，非实际操作代码）： “`python

    模拟DNA提取后浓度计算（假设A260读数）

    def calculate_dna_concentration(OD260, dilution_factor=1): “”” 计算DNA浓度 (μg/mL) OD260: 分光光度计读数 dilution_factor: 稀释倍数 “”” concentration = OD260 * 50 * dilution_factor # 双链DNA系数为50 return concentration

# 示例：OD260 = 0.8, 稀释10倍 conc = calculate_dna_concentration(0.8, 10) print(f”DNA浓度: {conc} μg/mL”) # 输出: DNA浓度: 400 μg/mL “` 此代码帮助分析提取结果，确保DNA质量。

5. 观察与分析

使用显微镜检查样本。主题句：显微镜观察是验证细胞质量的关键。

  • 将固定涂片置于显微镜载物台，从低倍镜（10×）开始观察，调整至高倍镜（40×）。
  • 记录细胞形态：正常上皮细胞为多边形、核小；异常细胞可能显示核大、多核或异型。示例：在感染病例中，可见白细胞增多或真菌孢子；在癌变中，细胞核质比增大。

6. 清理与记录

实验结束后，丢弃一次性用品，消毒可重复设备。记录操作细节，如受试者信息、刮取部位、观察结果。

注意事项

严格遵守注意事项可确保实验安全和结果可靠。以下按类别分述：

安全与无菌

  • 个人防护：始终戴手套，避免直接接触口腔液体。如果受试者有传染病（如乙肝），使用额外防护（如护目镜）。
  • 无菌操作：所有工具必须无菌，避免触摸非无菌表面。示例：如果棉签污染，可能导致细菌生长，干扰镜检。
  • 废物处理：生物废物（如刮片）应高压灭菌或焚烧处理，遵守实验室生物安全规范。

操作技巧

  • 力度控制：轻柔刮取，避免出血。出血会稀释细胞，影响结果。如果出血，立即停止并用纱布止血。
  • 样本新鲜度：刮取后立即处理，理想时间<30分钟。延迟会导致细胞自溶。示例：在野外采样时，可将刮片置于液氮中速冻保存。
  • 避免污染：不要重复使用工具，不同受试者间更换手套。唾液过多时，用棉签吸除多余液体。

特殊人群与情况

  • 儿童或敏感者：动作更轻柔，使用柔软棉签，避免惊吓。
  • 口腔病变患者：避开溃疡或出血区，选择健康黏膜。
  • 质量控制：每批实验设置阳性对照（如已知正常细胞样本）和阴性对照（无细胞样本）。

常见错误及预防

  • 错误：刮取过深导致疼痛或出血。预防：练习在模型上操作，控制角度<30°。
  • 错误：涂片不均导致细胞堆积。预防：使用“拉丝”技术，即从一端均匀拉向另一端。
  • 错误：固定不及时导致细胞变形。预防：准备固定液在旁，刮取后立即浸入。

常见问题与解决方案

  • 问题：细胞数量不足。解决方案：增加刮取次数或选择颊黏膜后部（细胞更密集）。如果仍不足，尝试用生理盐水冲洗黏膜后刮取。
  • 问题：样本污染。解决方案：重新采样，加强无菌措施；镜下观察时，注意区分细胞与杂质。
  • 问题：染色不均。解决方案：检查染液pH值（应为中性），延长染色时间或更换试剂。
  • 问题：受试者不适。解决方案：解释过程，提供漱口水缓解；如果疼痛，停止操作并咨询医生。

结论

口腔上皮细胞刮取实验是一种高效的细胞学工具，通过本指南的详细步骤和注意事项，您可以安全、准确地完成操作。记住，实践是关键——初次操作可在监督下进行。实验结果应结合临床背景解读，如有疑问，咨询专业医师或病理学家。坚持无菌和轻柔原则，将确保实验的成功率和可靠性。